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植物脫氫酶（Plant dehydrogenase, pDHA） 試劑盒說明書

點擊下載該文件    日期：2019/10/30 16:35:57

植物脫氫酶試劑盒測定意義
生物體的脫氫酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物體的活性狀態(tài)，能直接表示生物細胞對其基質(zhì)降解能力的強弱。
植物脫氫酶試劑盒測定原理
受氫體 2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即 TTC）在細胞呼吸過程中接受氫以后，其還原產(chǎn)物三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone，即 TF）呈現(xiàn)紅色，在波長 485nm 處有最大吸收峰，測定其 485nm 吸光值，即得植物脫氫酶活性。
需自備實驗儀器及用品
恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、研缽、濾紙、可見分光光度計、1mL 比色皿、冰、蒸餾水和乙酸乙酯（不允許快遞，請用戶自備）。
植物脫氫酶試劑盒試劑的組成和配制
試劑一：粉劑×2瓶，使用前加少量水溶解，定容至60mL，避光、4℃保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）。
試劑二：液體 60mL×6，4℃保存。
試劑三：乙酸乙酯，自備。
植物脫氫酶試劑盒樣品處理
稱取 0.5-1g 的植物組織，用雙蒸水清洗 3-4 次，用濾紙吸干水分，備用。
酶活單位定義：在 37℃時，每小時每克樣品使反應(yīng)體系 OD 值每增加 0.01 為一個酶活單位。
計算公式：脫氫酶活性（U/g·h）=（OD485測定-OD485對照）÷0.01 ÷樣品質(zhì)量(g) ÷反應(yīng)時間（h）
植物脫氫酶試劑盒注意事項
1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃，盡量在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。
2. 試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請穿實驗服，戴口罩，戴乳膠手套操作。
3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng)，并去除干凈殘留的反應(yīng)液。
4. 如果測定出來的吸光值較大，需把樣品適當(dāng)稀釋再進行測定。
5. 試劑盒 2-8℃保存。

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