細(xì)胞周期參數(shù)的測(cè)定
測(cè)量細(xì)胞周期參數(shù)的傳統(tǒng)方法是脈沖標(biāo)記有絲分裂指數(shù)曲線法，即PLM法。但此法費(fèi)時(shí)間，技術(shù)有絲分裂指數(shù)十分費(fèi)工且需一定經(jīng)驗(yàn)，由曲線得到周期參數(shù)通常還要用計(jì)算機(jī)擬合，這些都限制了該方法的使用。流式細(xì)胞術(shù)建立后，曾發(fā)展一種利用S時(shí)相內(nèi)的窗口，測(cè)定每個(gè)細(xì)胞放射性的方法，由其曲線可得出群體的Tc和Ts。
假定群體內(nèi)全部細(xì)胞都處在增殖狀態(tài)，即增殖比為1，所有的細(xì)胞動(dòng)力學(xué)均一，即每個(gè)細(xì)胞都以相同的速率通過各個(gè)時(shí)相。對(duì)這樣的群體經(jīng)【3H】-TdR脈沖標(biāo)記30分鐘后，再用DNA特異性染色，流式細(xì)胞計(jì)測(cè)定DNA直方圖，如圖中的b圖。此圖上S時(shí)相中間位置2是個(gè)分選窗口，對(duì)應(yīng)細(xì)胞周期圖a上S時(shí)相相應(yīng)部分也用粗線標(biāo)了出來。將此窗口內(nèi)的細(xì)胞分選出來，測(cè)定其RC值。如果在標(biāo)記后不同時(shí)間分選，或標(biāo)記后不同時(shí)間收貨細(xì)胞，固
定，染色，分別分選然后測(cè)定RC值，則可得圖c中的實(shí)線，因?yàn)椤?/span>3H】-TdR只是為S期細(xì)胞所摻入，故實(shí)線左邊第一個(gè)峰寬為1/2Ts，但通常誤差較大因而不用，第二個(gè)峰寬為Ts，上述兩峰間的距離是Tco因?yàn)榉诌x窗口定在S時(shí)相，故此方法稱為RCSi方法。如果分選窗口在G1時(shí)相，如圖b中窗口1，則稱為RCG1，其相應(yīng)示意圖在c圖上用虛線表示。 由于實(shí)際群體動(dòng)力學(xué)參數(shù)不可避免的離散性，結(jié)果得到的實(shí)際曲線不可能是c圖的樣子而是圖d中的圓點(diǎn)（RCSi）或方點(diǎn)（RCG1），這是CHO細(xì)胞實(shí)測(cè)的結(jié)果。為從這樣一組數(shù)據(jù)中提取到動(dòng)力學(xué)信息，必須用專門的計(jì)算機(jī)擬合程序分析，最后得出TG1、Ts和TG2M分別為2.4小時(shí)，6.5小時(shí)和1.6小時(shí)。
本方法中的窗口要求在與其他時(shí)相不重疊的位置，因而選在圖b中“2”的位置。從原理上說，窗口應(yīng)該窄一些為好，但窗口愈窄分選出足夠細(xì)胞數(shù)量的時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)一些，從這個(gè)角度看起來，RCG1方法因G1期細(xì)胞多而集中，可能較RCSi為佳，但相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析方法略有不同。只是對(duì)儀器操作人員要求有較好的素質(zhì)、較多的經(jīng)驗(yàn)、操作要熟練，否則難以勝任。
原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司
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