石蠟包埋組織單細胞分散的方法和步驟

點擊次數(shù)：1977　日期：2016/8/10 8:44:33

石蠟包埋組織單細胞分散的方法和步驟

采用組織切片一胃蛋白酶消化法。1、將石蠟包埋組織塊在切片機上切去40—50um的組織片。2、將組織片放入試管，加入3.0ml二甲苯脫蠟，一般在室溫下脫1—2天。中間可換二甲苯一次，以確保石蠟脫凈。檢查石蠟是否脫凈，可將二甲苯棄去，加入無水乙醇，如有白色絮狀物浮起，表明石蠟未凈。3、梯度酒精水化：分別以100%、95%、70%、50水化組織片，每步10分鐘，棄去酒精，加入蒸餾水5ml漂洗1—2次，3—5分鐘后棄去。4、胃蛋白酶消化：以生理鹽水配制0.5%的胃蛋白酶，鹽酸調(diào)pH值為1.5（新鮮配制，一周內(nèi)為宜）。每個試管中加入胃蛋白酶消化液3—5ml，放入37℃恒溫水浴鍋孵育30分鐘，每隔5—10分鐘振蕩一次。5、終止消化：消化后，立即加入生理鹽水至10ml，離心沉淀1500rpm，5分鐘，棄上清，再加入生理鹽水漂洗，以100目尼龍網(wǎng)過濾，除去未消化完的組織片，以短時低速離心沉淀，去上清，加入冰冷70%乙醇固定，放冰箱備檢。

石蠟包埋組織分散的單細胞懸液基本上以核為主，經(jīng)形態(tài)學觀察，核結(jié)構(gòu)保持完好，有的細胞核周圍仍殘留部分胞漿（圖1）。作者對消化前后的組織片進行了觀察，發(fā)現(xiàn)消化前為實性團塊的腫瘤組織，在消化后，實性團瘤細胞出現(xiàn)了一個個篩孔狀結(jié)構(gòu)。如胃的管狀腺癌（圖2），在消化后癌細胞從管壁脫落，僅殘留管壁組織（圖3），而周圍間質(zhì)成分的結(jié)構(gòu)仍保持完好。從消化前、后的組織切片的觀察結(jié)果，切片一胃蛋白酶消化法對石蠟包埋腫瘤細胞具有選擇消化作用，這可能與癌細胞連結(jié)不緊密、易脫落有關.

石蠟包埋組織的切片厚度。會影響單細胞懸液的質(zhì)量，也會影響流式分析結(jié)果。要獲得較滿意的單細胞樣品，切片厚度在40—50um較適宜；脫蠟要干凈；消化時間要掌握好，并采取有效的去雜質(zhì)碎片方法。

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司

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